蘇木素染色液染色后細(xì)胞核呈藍(lán)色。本染色液可以和免疫熒光染色或免疫組化染色配合使用。一方面可以在本蘇木素染色液染色后進(jìn)行免疫熒光染色或其它染料的染色,另一方面也可以在免疫組化染色后再進(jìn)行蘇木素復(fù)染。本染色液可以重復(fù)使用,直至認(rèn)為效果不佳時再換用新的染色液。一個包裝的本染色液至少可以染色200個樣品。
蘇木素染色液使用說明:
1. 樣品處理
a) 對于石蠟切片:
二甲苯中脫蠟5-10分鐘。
換用新鮮的二甲苯,再脫蠟5-10分鐘。
無水乙醇5分鐘。
90%乙醇2分鐘。
70%乙醇2分鐘。
蒸餾水2分鐘。
b) 對于冰凍切片:
蒸餾水2分鐘。
c) 對于培養(yǎng)細(xì)胞:
用4%多聚甲醛固定10分鐘以上。
蒸餾水洗滌2分鐘。
換用新鮮的蒸餾水,再洗滌2分鐘。
2. 蘇木素染色
對于上述處理好的樣品:蘇木素染色液染色5-10分鐘(可以根據(jù)染色結(jié)果和要求調(diào)整時間)。
浸自來水中沖洗去多余的染色液,約10分鐘。
蒸餾水再洗滌一遍(數(shù)秒鐘)。
95%乙醇5秒。
此時,如果需要直接觀察,可以用70%乙醇洗滌2次。如需脫水、透明后封片按后續(xù)步驟進(jìn)行,70%乙醇洗滌后仍可按照后續(xù)步驟進(jìn)行脫水、透明和封片處理。
注:如果用于免疫組化等染色后的復(fù)染,可以參考上述步驟在其它染色完成后直接進(jìn)行蘇木素染
色。
3. 脫水、透明、封片或進(jìn)行其它染色
a) 脫水、透明、封片:
95%乙醇脫水2分鐘。
換用新鮮的95%乙醇再脫水2分鐘。
二甲苯透明5分鐘。
換用新鮮的二甲苯,再透明5分鐘。
用中性樹膠或其它封片劑封片。
顯微鏡下觀察,細(xì)胞核呈藍(lán)色。
b) 進(jìn)行其它染色:
如果進(jìn)行免疫熒光染色,或進(jìn)行Hoechst等熒光染料的染色,在
蘇木素染色液染色后:
70%乙醇洗滌2次,每次2分鐘。
PBS或生理鹽水或TBS或TBST等用于免疫染色或熒光染料染色的溶液浸泡5分鐘。
然后就可以進(jìn)行免疫熒光染色或其它熒光染料的染色了。
保存條件:
室溫避光保存,至少一年有效。
注意事項(xiàng):
需自備4%多聚甲醛、70%乙醇和95%乙醇。如果需要脫水、透明和封片處理,還需自備二甲苯,中性樹膠或其它封片劑。如果樣品是石蠟切片,需自備90%乙醇,無水乙醇以及二甲苯。
染色液可以重復(fù)使用多次,認(rèn)為效果不佳時再更換新的染色液。
使用本試劑盒時建議先取1-2個樣品做預(yù)實(shí)驗(yàn)。
為了您的安全和健康,請穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。
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